临床医学论文_过滤对超速离心法提取外泌体的

文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

    1.2.1 血浆标本留取

    1.2.2 PC-9/IR细胞培养

    1.2.3 血浆外泌体的提取

    1.2.4 培养上清外泌体的提取

    1.2.5 外泌体过滤

    1.2.6 纳米颗粒追踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)

    1.2.7 外泌体抗体染色

    1.2.8 Aminis量化成像流式分析

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 外泌体的鉴定

2.2 纳米颗粒跟踪分析检测过滤组与未过滤组外泌体粒径及数量的变化

2.3 Amnis量化成像流式检测过滤组与未过滤组外泌体数量及纯度的变化

3 讨论

文章摘要:目的 明确过滤对超速离心法提取外泌体数量及纯度的影响,为当前外泌体的提取方法提供一定参考。方法 收集健康人血浆和肺癌PC-9/IR细胞培养上清,分为未过滤组（unfiltration group,NC）和过滤组（filtration group,GL）,过滤组采用0.22μm过滤器过滤。超速离心法提取外泌体,纳米颗粒跟踪分析（nanoparticle tracking analysis,NTA）检测过滤前后纳米颗粒（外泌体）数量及粒径大小变化,Aminis成像流式检测过滤前后CD9⁺外泌体（CD9⁺ exosomes,CD9⁺Exo）和CD63⁺外泌体（CD63⁺ exosomes,CD63⁺Exo）数量及百分比。结果 NTA结果显示,与NC组相比,血浆过滤后外泌体数量下降4.7倍,培养上清过滤后外泌体数量下降2.5倍。Aminis成像流式结果显示,血浆中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的数量过滤后分别下降了5倍和2.6倍,培养上清中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的数量过滤后分别下降了3倍和2.3倍,差异均有统计学意义（P<0.05）。同时,Aminis成像流式结果显示,过滤后颗粒中CD9⁺Exo和CD63⁺Exo的百分比没有提高,差异无统计学意义。结论 过滤降低了超速离心法提取外泌体的数量,并未提高外泌体的纯度。

文章关键词:

项目基金:北京市自然科学基金(7212172),

论文作者:李榕¹ 陈静² 李传云³ 周童⁴ 陈欢² 陈德喜² 乔跃兵¹ 李伟华² 

作者单位:1. 承德医学院人体解剖与组织胚胎学教研室 3. 首都医科大学附属北京佑安医院外科中心 4. 中南大学湘雅公共卫生学院 

论文分类号: R446

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